发明提供一种微生物细胞转化法生产2-酮基-D-葡萄糖酸的方法,包括:A:以氧化葡萄糖酸杆菌DSM 2003的基因工程菌株为菌种制备静息细胞,其中,所述基因工程菌株是指过表达葡萄糖酸脱氢酶的氧化葡萄糖酸杆菌,葡萄糖酸脱氢酶的基因来源于所述氧化葡萄糖酸杆菌,具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列;B:制备含有葡萄糖或葡萄糖酸的转化液,葡萄糖的浓度为200~250g/L,葡萄糖酸的浓度为200~300g/L;C:向所述转化液中加入30~60g/L静息细胞进行转化,即得所述2-酮基-D-葡萄糖酸。本发明提供的方法具有转化率高、产物单一、分离纯化简单、节约生产成本、细胞易回收、可重复利用等优点。