The present invention discloses a method for producing glyphosate-resistant rice by site-directed nucleotide substitution, as well as a method for making site-directed nucleotide substitution and fragment replacement. The method for producing a plant provided by the present invention includes the following steps: just one replacement of threonine (T) at position 8 of the amino acid sequence of the conserved portion of the endogenous EPSPS protein of the target plant with isoleucine (I) and replacement of proline (P) at position 12 with serine (S), t . glyphosate resistant plants. The method according to this invention is of great importance for the selection of new varieties of plants resistant to herbicides. The present invention also discloses a method of using an NHEJ-mediated CRISPR-pathway to replace the region between two g-RNA sites by creating two g-RNA sites, thereby realizing the site-directed mutation of the target nucleotide and the site-directed fragment replacement.Настоящее изобретение раскрывает способ получения риса, устойчивого к глифосату, путем сайт-направленной замены нуклеотида, а также способ, обеспечивающий осуществление сайт-направленной замены нуклеотида и замены фрагмента. Способ получения растения, обеспечиваемый настоящим изобретением, включает следующие этапы: всего одну замену треонина (Т) в позиции 8 аминокислотной последовательности консервативного участка эндогенного белка EPSPS целевого растения изолейцином (I) и замену пролина (Р) в позиции 12 серином (S), т.е. растения, устойчивого к глифосату. Способ по данному изобретению имеет большое значение для селекции новых сортов растений, устойчивых к гербицидам. Настоящее изобретение также раскрывает способ использования CRISPR-опосредованного NHEJ пути для замены участка между двумя g-РНК сайтами посредством создания двух g-РНК сайтов, реализуя тем самым сайт-направленную мутацию целевого нуклеотида и сайт-направленную замену фрагмента.
