彗星分析法研究靶向SMPD1的siRNA对小鼠卵母细胞凋亡的保护作用

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作   者：

张仁礼;  孟锦绣;  闻安民;  黄跃深;  周灿权;  王凯;  贾磊;  刘彩霞;  邓新燕;  陈系古; 

作者机构：

广东省医学科学院/广东省人民医院医学研究中心;  中山大学实验动物中心;  广东省医学科学院/广东省人民医院生殖医学中心;  中山大学附属第一医院生殖医学中心;  广东省医学科学院/广东省人民医院皮肤科; 

关键词：

细胞凋亡;  RNA干扰;  卵母细胞;  彗星分析法;  酸性鞘磷脂酶1; 

期刊名称：

南方医科大学学报

基金项目：

RNA干扰方法建立酸性鞘磷脂酶基因沉默小鼠的研究
风湿性瓣膜性心脏病相关自身抗原的动态识别及其临床意义研究

i s s n：

1673-4254

年卷期：

2009 年 11 期

页   码：

2165-2167+2170

摘   要：

目的建立彗星分析小鼠卵母细胞凋亡的模型,研究靶向酸性鞘磷酯酶1(SMPD1)的siRNA对卵子自发性凋亡的保护作用,为建立新的生殖保护方法奠定基础。方法通过同源性分析并结合siRNA设计软件设计并化学合成靶向SMPD1的3条siRNA,用超排卵技术对雌性BALB/c小鼠进行超排卵并杀鼠取卵,利用显微注射的方法将siRNA分别导入超排获得的小鼠卵子,分别于48h和72h观察卵子形态学变化,通过彗星分析检测卵细胞DNA破坏程度来分析卵子自发性凋亡情况。结果彗星分析法观察到小鼠卵母细胞在体外培养24h可见少量DNA泳出,48h可见大量DNA泳出;通过显微注射导入siRNA48h后的彗星分析结果显示,其中1对siRNA注射组,即siRNA003组的卵母细胞泳出量与其它2个siRNA注射组及对照组相比显著降低(P<0.01),其它2对siRNA注射组与对照组无明显差异。结论靶向SMPD1的siRNA能够有效保护卵子的自发性凋亡,有望成为新的生殖保护方法。