金黄色葡萄球菌锰超氧化物歧化酶的表达纯化及活性分析

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作   者：

杨宇虹;  严洁;  李杰; 

作者机构：

永州职业技术学院生物化学教研室; 

关键词：

生物信息学;  蛋白表达与纯化;  金黄色葡萄球菌;  锰超氧化物歧化酶; 

期刊名称：

中国病原生物学杂志

基金项目：

哈密顿系统及分数阶微分方程的动力学行为研究

i s s n：

1673-5234

年卷期：

2020 年 15 卷 01 期

页   码：

5-9

摘   要：

目的克隆表达、纯化金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)并测定其活性。方法使用Clustal Omega比对不同来源Mn-SOD的序列,使用Swiss model网站预测金黄色葡萄球菌Mn-SOD的三级结构。提取细菌DNA,以此为模板PCR扩增获得Mn-SOD基因并将其与pET28a连接,构建pET28a-Mn-SOD重组质粒。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)获得重组菌BL/pET28a-Mn-SOD,使用IPTG诱导表达重组Mn-SOD,通过镍柱亲和层析纯化Mn-SOD蛋白并测定不同pH条件下的酶活性。结果金黄色葡萄球菌Mn-SOD具有Mn-SOD的特征序列和锰离子结合位点。成功得到重组质粒pET28a-Mn-SOD,转化大肠埃希菌BL21后表达相对分子质量为24.8×10~3的Mn-SOD,使用Ni~(2+)柱纯化后得到高纯度的Mn-SOD,且在pH值为7.5时活性较高,约为3 200 U/mL。结论成功构建了pET28a-Mn-SOD重组质粒能,表达的Mn-SOD重组蛋白纯化后仍具有SOD活性。