The present application relates to a cell cryopreservation protective composition, the use of the composition, and a cell cryopreservation method. The cell cryopreservation protective composition comprises an amphiphilic molecule having the general formula R1-N+(CH3)2-(CH2)n-R2, wherein R1 is a linear or branched alkyl having 1 to 10 carbon atoms, and is optionally substituted with a substituent； R2 is any negatively charged group selected from the group consisting of -COO-, -SO4-, -SO3- and (I)； and R3 is a group selected from the group consisting of (methyl)acryloyloxyalkyl, alkyl and alkenyl； and the amphiphilic molecule having the general formula R1-N+(CH3)2-(CH2)n-R2 is preferably a betaine compound. The cell cryopreservation protective composition can carry out cell cryopreservation in a non-toxic and efficient manner, and results in an extremely high survival rate after cell thawing and does not require gradient cryopreservation. After cell thawing, the cells can be used directly or after being slightly diluted.La présente invention concerne une composition protectrice de cryoconservation de cellules, l'utilisation de la composition, et un procédé de cryoconservation de cellules. La composition protectrice de cryoconservation de cellules comprend une molécule amphiphile ayant la formule générale R1-N+(CH3)2-(CH2)n-R2, où R1 est un alkyle linéaire ou ramifié ayant 1 à 10 atomes de carbone, et est éventuellement substitué par un substituant ； R2 est tout groupe chargé négativement choisi dans le groupe constitué par -COO-, -SO4-, -SO3- et (I) ； et R3 est un groupe choisi dans le groupe constitué par le (méthyl)acryloyloxyalkyle, l'alkyle et l'alkényle ； et la molécule amphiphile ayant la formule générale R1-N+(CH3)2-(CH2)n-R2 est de préférence un composé de bétaïne. La composition protectrice de cryoconservation de cellules permet d'effectuer une cryoconservation de cellules d'une manière non toxique et efficace et d'obtenir un taux de survie extrêmement élevé
