本发明公开了一种用于构建siRNA表达载体的空载体及其重组载体和应用。该空载体从5’到3’依次包括:1)来源于CMV RNA聚合酶II依赖型启动子序列;2)pri-MiR21前部片段序列SEQ ID NO.1;3)限制性内切酶酶切位点序列;4)pri-MiR21后部片段序列SEQ ID NO.2;5)终止子序列。在限制性内切酶酶切位点插入序列siRNA正义序列-MiR21环结构序列-siRNA反义序列,即得siRNA重组表达载体。本发明采用RNA Pol II启动子,可方便有效地将shRNA连接到pri-MiR21骨架上,使shRNA经由RNAPol II启动子稳定表达,且表达高效,提高了RNAi的敲减效率。