The present invention relates to a duplex vibriocidal assay capable of simultaneously measuring vibriocidal serum antibody titer with respect to each serotype when a combined Vibrio vaccine prepared by mixing two or more kinds of strains is evaluated after the combined vaccine is administrated. The assay of the present invention can obtain the same level of results as a single vibriocidal assay with respect to efficiency, and can reduce analysis time, labor, an amount of reagents, and the amount of serum necessary for analysis compared to the single vibriocidal assay.본 발명은 두 가지 이상의 균주를 혼합하여 제조된 비브리오균 혼합백신 투여 후 백신을 평가할 때, 각 혈청형에 대한 비브리오사멸 혈청항체가를 동시에 측정할 수 있는 듀플렉스 비브리오사멸 분석법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 분석법은 효율 면에서는 개별 비브리오사멸 분석법과 동등한 결과를 얻을 수 있으며, 개별 비브리오사멸 분석법보다 분석 시간, 노동력 및 시약의 양을 줄일 수 있을 뿐만 아니라 분석에 필요한 혈청의 양 또한 절약할 수 있는 효과가 있다.