THE CHILDREN'S HOSPITAL OF PHILADELPHIA;THE CHILDRENS HOSPITAL OF PHILADELPHIA
发明人:
HIGH, Katherine, A.,WRIGHT, John Fraser,HAUCK, Bernd,QU, Guang
申请号：
USUS2012/069212
公开号：
WO2013/090409A1
申请日:
2012.12.12
申请国别(地区):
US
年份:
2013
代理人:
摘要：
In accordance with the present invention, a method for increasing the yield of rLV vector particles comprising a trans gene encoding a therapeutic protein or fragment thereof is disclosed. In one approach, cells are transfected with plasmids encoding the necessary components for rLV production using a calcium chloride transfection mix at pH 7.1 wherein the calcium chloride and plasmids form a complex which is added to the cells at a constant speed. The cells are then incubated for a suitable time period wherein virus particle media is collected at least twice during the incubation period and stored in a cold storage unit, thereby reducing virus inactivation.Cette invention concerne un procédé permettant d'augmenter le rendement de particules de vecteur rLV comprenant un gène trans codant pour une protéine thérapeutique ou un fragment de celle-ci. Selon une approche, les cellules sont transfectées avec des plasmides codant pour les composants nécessaires à la production du rLV à l'aide d'une préparation de transfection à base de chlorure de calcium à pH 7,1, le chlorure de calcium et les plasmides formant un complexe qui est ajouté aux cellules à vitesse constante. Les cellules sont ensuite incubées pendant un laps de temps convenable au cours duquel le milieu des particules virales est collecté au moins deux fois pendant la période d'incubation et stocké dans une unité de stockage à froid, pour réduire ainsi l'inactivation du virus.
