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一种用于敲除SPARC基因的CRISPR-Cas9系统
- 专利权人:
- 北京大学第三医院(北京大学第三临床医学院)
- 发明人:
- 马云龙,宋春雨,窦新雨
- 申请号：
- CN202211349884.2
- 公开号：
- CN115747219A
- 申请日:
- 2022.10.31
- 申请国别(地区):
- CN
- 年份:
- 2023
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明涉及一种用于敲除SPARC基因的CRISPR/Cas9系统、sgRNA的筛选方法及应用。该用于敲除SPARC基因的sgRNA的筛选方法包括如下步骤：提供一个或多个含有T7启动子的T7‑sgRNA骨架，所述T7‑sgRNA骨架包括酶切位点序列、T7启动子序列和sgRNA序列；以所述T7‑sgRNA骨架为模板，对其进行PCR扩增及体外转录，得到包含PCR产物和sgRNA的复合体；以及通过Cas9蛋白对所述包含PCR产物和sgRNA的复合体进行体外酶切，以酶切效率对sgRNA进行筛选。本发明一实施方式的筛选方法，可同时高效的对多个sgRNA进行筛选，能够显著降低筛选成本，可缩短基因敲除小鼠的制备时间，并高效的获得SPARC基因敲除小鼠。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
