本发明公开了一种同时检测樱桃是否感染苹果褪绿叶斑病毒和李属坏死环斑病毒的方法及专用引物。该用于检测植物病毒的引物,为引物对甲和引物对乙;所述引物对甲为检测苹果褪绿叶斑病毒的引物对,一条引物序列如SEQ ID No.1所示,另一条引物序列如SEQ ID No.2所示;所述引物对乙为检测李属坏死环斑病毒的引物对,一条引物序列如SEQ ID No.3所示,另一条引物序列如SEQ ID No.4所示。本发明中所建立的多重RT-PCR可以同时检测出生产中樱桃ACLSV和PNRSV病毒复合侵染现象,比单一RT-PCR节省时间;操作上也更为简单;此外,也减少了试验中所消耗的药品,更为经济。当反转录体系中的带病植株的总RNA量为10-4μg时,经过PCR扩增后,仍可以同时检测到两种病毒。