本发明公开了一种桑黄菌(火木层孔菌Phellinus igniarius(L ex Fr)Quel、裂蹄木层孔菌 phellinus linteus(Berk et Curt)Teng、鲍氏层孔菌、哈蒂针层孔菌Phellinus hartigii (Allesch et Schnabl)Imaz)中环(L-苯丙氨酸-L-脯氨酸的分离方法。首先制备桑黄菌粗提物,然后进行正相硅胶层析,然后是甲醇梯度洗脱,再次进行正相硅胶层析,经HPLC检测,进行高压反相制备,再次甲醇凝胶层析,然后HPLC检测最后是1D-HNMR检测,最终即得环(L-苯丙氨酸-L-脯氨酸。