本发明提供了一种用于检测鸭甲肝病毒1型的纳米PCR试剂盒及其应用。所述试剂盒包括:反转录酶、5×反转录缓冲液、RNA酶抑制剂、0.1M DTT、dNTPs混合液和反转录引物,2×NanoPCR Mix、上游引物和下游引物,其中序列为SEQ ID No.1‑2所示。该试剂盒可用于检测鸭甲肝病毒1型。本发明还提供了一种采用前述试剂盒检测鸭甲肝病毒1型的方法,使用本试剂盒能够特异、快速的检测鸭甲肝病毒1型,大大提高了鸭甲肝病毒1型的检测效率及特异性扩增产量,缩短了检测时间。本试剂盒可在基层兽医检测广泛应用,对不同品种鸭和鹅感染鸭甲肝病毒1型的快速检测提供新的方法。