The subject matter of the present disclosure provides compositions and methods that include improvements in CRISPR systems (eg, CRISPR-related (Cas) 9 (CRISPR-Cas9, non-Cas9 CRISPR systems), such compositions comprising modifications to the H1 promoter region, Addition of 5′UTR modifications, different orthologous sequences of the H1 promoter, novel compact bi-directional promoter sequences with both pol II and pol III activities, addition of Kozak consensus sequences, termination sequences, conditional pol II / pol III Addition of bi-directional promoter expression, addition of donor template sequences to correct mutations, or combinations thereof Other aspects of the invention include the addition to Cas9 via a post-transcriptional cell cycle regulatory fusion. Modification, nuclease can bind without DNA cleavage Partial target site engineered to be one, an autoregulatory site, and an N-terminal modification to modulate half life.本開示の主題は、ＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）９（ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９、非Ｃａｓ９ＣＲＩＳＰＲシステム）の改善を含む組成物および方法を提供する。かかる組成物は、Ｈ１プロモーター領域への修飾、５’ＵＴＲ修飾の追加、Ｈ１プロモーターの異なるオルソロガスな配列、ｐｏｌ ＩＩおよびｐｏｌ ＩＩＩの両方の活性を有する新規のコンパクトな双方向プロモーター配列、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列の追加、終結配列、条件的ｐｏｌ ＩＩ／ｐｏｌ ＩＩＩ双方向プロモーター発現の追加、突然変異を修正するためのドナー鋳型配列の追加、またはそれらの組合せを含み得る。本発明の他の態様は、転写後細胞周期調節融合物を介したＣａｓ９への修飾、ヌクレアーゼがＤＮＡ切断なしに結合できるように操作された部分的標的部位、自己調節部位、および半減期をモジュレートするためのＮ末端修飾に関する。
