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一种性能改进的重组金黄色葡萄球菌蛋白A亲和配基及其构建方法
- 专利权人:
- 江南大学
- 发明人:
- 夏海锋,吴璞强,梁振东,王沙莉,郑梦杰
- 申请号：
- CN201310097553.9
- 公开号：
- CN103214563A
- 申请日:
- 2013.03.26
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2013
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明公开了一种性能改进的重组金黄色葡萄球菌蛋白A亲和配基及其构建方法。本发明利用分子生物学方法，选取天然蛋白A的B序列进行分子改造，在B序列的C端添加2个半胱氨酸，从而可以将蛋白A通过双位点偶联的层析基质，使连接更加稳定，在B序列第二个Loop后面添加了6个甘氨酸增加其长度，降低与抗体之间的结合力，从而使洗脱条件更加温和。在此基础上对蛋白A耐高浓度碱的性能进行改造，将B序列第23、30位的天冬酰胺和苯丙氨酸分别替换成苏氨酸和丙氨酸，得到耐碱性能更高的Z序列。然后，利用同尾酶将不同数量的Z序列首尾串联，并利用大肠杆菌的高效表达系统进行过量表达。将表达的重组蛋白A偶联到琼脂糖基质制备亲和层析填料，并用于纯化抗体，结果表明本发明制备的重组蛋白A亲和配基具有较好的洗脱性能和耐碱性能。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
