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重组金黄色葡萄球菌ClfA蛋白疫苗及其真核表达工程细胞系的构建方法
- 专利权人:
- 甘肃农业大学
- 发明人:
- 赵兴绪,武小虎,张全伟,马友记,张勇
- 申请号：
- CN201611087120.5
- 公开号：
- CN106591327A
- 申请日:
- 2016.11.30
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2017
- 代理人:
- 张克勤`田玉兰
- 摘要：
- 本发明公开了一种重组金黄色葡萄球菌ClfA蛋白疫苗及其真核表达工程细胞系的构建方法，属于生物制药领域。包含金黄色葡萄球菌ClfA基因序列为SEQ ID NO.1所示。构建方法主要步骤为：分离和鉴定金黄色葡萄球菌，提取其基因组DNA。以提取的金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板，设计引物扩增ClfA基因序列。将ClfA序列经连接
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‑T1 Simple Cloning Vector并在DH5α扩增，提取质粒分别对ClfA和pcDNA 3.1 V5‑His B进行双酶切和连接，得到重组质粒ClfA‑pcDNA 3.1 V5‑His B。将连接回收产物转化大肠杆菌DH5α，筛选阳性克隆并提取重组质粒ClfA‑pcDNA 3.1，借助脂质体2000(lippo2000)转染人乳腺癌细胞MCF‑7，用G‑418筛选阳性细胞克隆和高表达克隆。本发明能够克服原核生物表达长序列基因编码大分子量蛋白产物时，蛋白产物易于形成包涵体而不易纯化
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
