PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a simple and highly-efficient production method of a gene-modified non-human mammal utilizing a CRISPR-Cas9 system, especially a production method capable of performing gene knocked-in highly efficiently regardless of a gene size.SOLUTION: In a production method of a gene-modified non-human mammal, a crRNA fragment and a tracr RNA fragment containing a base sequence complementary to a Cas9 protein and a target DNA region are introduced into oocyte of a non-human mammal, and gene modification of the target DNA is carried out.SELECTED DRAWING: NoneCOPYRIGHT: (C)2017,JPO&INPIT【課題】CRISPR-Cas9システムを利用した簡便で、かつ高効率の遺伝子改変非ヒト哺乳動物の作製方法、特に、遺伝子サイズに関係なく、高効率にて遺伝子ノックインを可能とする作製方法を提供することを目的とする。【解決手段】Cas9タンパク質、標的DNA領域と相補的な塩基配列を含むcrRNA断片及びtracr RNA断片を非ヒト哺乳動物の卵母細胞に導入し、該標的DNAを遺伝子改変することを含む、遺伝子改変された非ヒト哺乳動物の作製方法。【選択図】なし