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双表达的AAV重组病毒的制备方法
专利权人:
中国农业科学院兰州兽医研究所
发明人:
柳纪省,杨彬,兰喜,邱燕,殷相平,李学瑞,李宝玉,白银梅,张韵,李志勇,方玉萍
申请号:
CN201210474111.7
公开号:
CN102925485A
申请日:
2012.11.09
申请国别(地区):
中国
年份:
2013
代理人:
摘要:
本发明公开了一种双表达的AAV重组病毒的制备方法,采用基因克隆技术将合成的特异性PRRSV RNA干扰寡核苷酸序列克隆至AAV Helper Free System中的表达质粒pAAV-U6-IRES-hrGFP的U6启动子下游,将PRRSV的ORF5-6结构蛋白基因克隆至pAAV-U6-IRES-hrGFP的CMV启动子的下游,构建成双效腺相关病毒载体pAAV-U6-IRES-hrGFP-siRNA-ORF5-6,通过酶切及PCR鉴定后进行DNA测序以鉴定重组质粒。实验证实,双效质粒转染靶细胞Marc145,有延迟细胞病变的作用,说明双表达AAV疫苗载体能够转录出siRNA,对病毒的转录复制有一定的抑制效果。
来源网站:
中国工程科技知识中心
来源网址:
http://www.ckcest.cn/home/

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