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双表达的AAV重组病毒的制备方法
- 专利权人:
- 中国农业科学院兰州兽医研究所
- 发明人:
- 柳纪省,杨彬,兰喜,邱燕,殷相平,李学瑞,李宝玉,白银梅,张韵,李志勇,方玉萍
- 申请号：
- CN201210474111.7
- 公开号：
- CN102925485B
- 申请日:
- 2012.11.09
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2014
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明公开了一种双表达的AAV重组病毒的制备方法，采用基因克隆技术将合成的特异性PRRSV RNA干扰寡核苷酸序列克隆至AAV Helper Free System中的表达质粒pAAV-U6-IRES-hrGFP的U6启动子下游，将PRRSV的ORF5-6结构蛋白基因克隆至pAAV-U6-IRES-hrGFP的CMV启动子的下游，构建成双效腺相关病毒载体pAAV-U6-IRES-hrGFP-siRNA-ORF5-6，通过酶切及PCR鉴定后进行DNA测序以鉴定重组质粒。实验证实，双效质粒转染靶细胞Marc145，有延迟细胞病变的作用，说明双表达AAV疫苗载体能够转录出siRNA，对病毒的转录复制有一定的抑制效果。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
