PROBLEM TO BE SOLVED: To provide monoclonal antibody-substituting binding molecules that specifically bind to a target of interest with high affinity and specificity.SOLUTION: Disclosed herein is a bispecific Fn3-based binding molecule comprising a first non-Fn3 binding sequence and a second non-Fn3 binding sequence, where, in the first non-Fn3 binding sequence at least one amino acid is altered in at least one of the bottom AB, CD or EF loop regions or the C terminal of the first non-Fn3 binding sequence compared to the wild type Fn3 domain, and the first non-Fn3 binding sequence binds to a frist target, and in the second non-Fn3 binding sequence, at least one amino acid is altered in at least one of the top BC, DE, or FG loop regions of the Fn3 domain compared to the wild type Fn3 domain, and the second non-Fn3 binding sequence binds to a second target where the first and second targets are present on different molecules.SELECTED DRAWING: None【課題】高い親和性および特異性で所望の標的に特異的に結合できるモノクローナル抗体代替結合分子の提供。【解決手段】第一の非Ｆｎ３結合配列および第二の非Ｆｎ３結合配列を含む二重特異性なＦｎ３ベースの結合分子であって、前記第一の非Ｆｎ３結合配列は、該第一の非Ｆｎ３結合配列の底部ＡＢループ領域、ＣＤループ領域もしくはＥＦループ領域またはＣ末端の１個以上において、野生型Ｆｎ３ドメインと比較して改変された少なくとも１個のアミノ酸を有し、かつ前記第一の非Ｆｎ３結合配列は、第一の標的に結合し、および前記第二の非Ｆｎ３結合配列は、該Ｆｎ３ドメインの上部ＢＣループ領域、ＤＥループ領域もしくはＦＧループ領域の１個以上において、野生型Ｆｎ３ドメインと比較して改変された少なくとも１個のアミノ酸を有し、かつ前記第二の非Ｆｎ３結合配列は、前記第一の標的と異なる分子に存在する第二の標的に結合する、結合分子。【選択図】なし
