In vitro culture of T-lymphocytes, preferably (non)modified T-lymphocytes penetrating tumors, from tumor or blood sample obtained from tumor patient, comprises emergence stage of T-lymphocytes contained in the tumor or blood sample, stimulation step of the obtained T-lymphocytes from the emergence stage and amplification step of the stimulated T-lymphocytes, where the stimulation is carried out in a closed compartmented culture recipient. An independent claim is included for an anti-tumor pharmaceutical composition, comprising the T-lymphocytes as active agent obtained by the process.Linvention concerne un procédé de culture in vitro de lymphocytes T, en particulier de lymphocytes T infiltrant les tumeurs dits TIL, modifiés ou non, à partir de prélèvement tumoral ou de sang issu de patient atteint de tumeur, ledit procédé comprenant successivement au moins une étape démergence des lymphocytes T contenus dans la tumeur ou le sang prélevé, une étape de stimulation des lymphocytes T issus de létape démergence et une étape damplification des lymphocytes T stimulés.Ce procédé est caractérisé en ce quon procède à la stimulation des lymphocytes T dans un récipient de culture clos compartimenté.
