一株高产5-KGA的氧化葡萄糖杆菌基因工程菌及其制备方法和应用

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专利权人:

浙江大学

发明人:

林建平,袁建锋,朱力,吴绵斌,杨立荣

申请号：

CN201510482472.X

公开号：

CN105002204A

申请日:

2015.08.03

申请国别(地区):

中国

年份:

2015

代理人:

黄平英

摘要：

本发明公开了一株高产5-KGA的氧化葡萄糖杆菌基因工程菌及其制备方法和应用，(1)将GA2DH基因和PDC基因的上、下游片段分别引入重组整合型自杀质粒，分别得自杀敲除质粒pΔGOX1231和pΔGOX1081；(2)将pΔGOX1231转入宿主菌中，依次经抗生素抗性筛选、无抗培养和蔗糖筛选，然后通过菌落PCR获取GA2DH基因敲除的阳性突变子G.oxydans ZJU1；同样方法将pΔGOX1081转入G.oxydans ZJU1中获取PDC基因敲除的阳性突变子G.oxydans ZJU2；(3)将sldAB、pqqABCDE、tldD、P₀₁₆₉及细胞色素bo₃氧化酶cyoBACD基因转入步骤(3)所得氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌G.oxydans ZJU2中即得。GA2DH是氧化葡萄糖酸形成2-KGA的主要酶，而PDC则与催化丙酮酸脱羧，形成乙醛相关，GA2DH和PDC的敲除可以解决5-KGA形成过程中的代谢分流，减少副产物，实现5-KGA的高产。

来源网站：

中国工程科技知识中心

来源网址：

http://www.ckcest.cn/home/