本发明提供了一种葡萄糖氧化酶突变体,是氨基酸序列为SEQ ID NO:1的葡萄糖氧化酶的第172位氨基酸由Asn变为Arg,第525位氨基酸由Cys变为Asn。上述葡萄糖氧化酶突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO:3,其一种编码基因的核酸序列为SEQ ID NO:4。本发明的葡萄糖氧化酶突变体的最适作用pH值为6.0,在pH4.0-6.0范围内均很稳定,pH耐受性与野生型差别不大;突变体的最适作用温度为40℃,且在60℃、65℃和70℃条件下分别处理1h后,仍能保持78.1%、47.7%和15.9%的残余酶活,耐热性远远高于野生型,从而说明突变导致葡萄糖氧化酶的耐热性得到大幅提升,这一特性使突变体GODP-2H比野生型更适合在工业生产中的应用。