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一种体外大量获得白蜡虫dsRNA的体系构建方法
- 专利权人:
- 中国林业科学研究院资源昆虫研究所
- 发明人:
- 陈航,凌晓霏,陆沁,张金稳,王伟伟,柳鹏飞,汪伟,陈晓鸣
- 申请号：
- CN202010427109.9
- 公开号：
- CN111607589A
- 申请日:
- 2020.05.19
- 申请国别(地区):
- CN
- 年份:
- 2020
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明涉及一种体外大量获得白蜡虫dsRNA的体系构建方法，首先提取白蜡虫总RNA并反转录为cDNA后进行PCR扩增，扩增产物与L4440载体质粒分别双酶切，将双酶切后产物连接，得到的重组质粒转化进入大肠杆菌感受态细胞HT115（DE3）菌株中，涂布固体培养基筛选单菌落，然后将单菌落液体摇床培养至OD600=0.38‑0.42，加入IPTG诱导后浓缩菌液，用于RNA干扰实验。本发明通过单细胞克隆大肠杆菌含有白蜡虫目标基因，又通过此大肠杆菌自身新陈代谢和大量的自我繁殖复制，获得大量含白蜡虫基因的dsRNA的菌液，将含dsRNA菌液喷施白蜡虫幼虫，从白蜡虫虫体表面进入体内，有效干扰目标基因表达量。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
