本发明公开了一株抗HPV16 E6蛋白的单克隆抗体。本发明的单克隆抗体的特征为具有氨基酸序列如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8所示的重链可变区、具有氨基酸序列如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14所示的轻链可变区。免疫印记实验显示该抗体能特异识别重组的HPV16 E6蛋白以及表达HPV16 E6蛋白的宫颈癌组织。该抗体可以用于通过人工或自动化方式,以免疫组织化学染色(IHC)、酶联免疫吸附(ELISA)或免疫印迹(Western Blot)方式检测细胞中HPV16 E6蛋白的表达水平,可特异性诊断HPV16病毒,这为在蛋白水平上检测HPV16型病毒提供了新手段,并可用于人类生殖系统传染性疾病及其肿瘤的研究,亦可用于食管癌、乳腺癌、肛门癌等相关恶性肿瘤的研究。