The invention relates to a method for preparing transmembrane pH-gradient vesicles. This method is characterized by the following steps: a) preparing vesicles made from at least one matrix substance in an aqueous medium having an osmolarity of not more than 200 mOsm/l, wherein the matrix substance is chosen from the group consisting of amphiphilic lipids and amphiphilic block copolymers, b) transferring the vesicles into a basic or acidic buffer having an osmolarity being at least 200 mOsm/l higher than the osmolarity of the aqueous medium of step a) to apply an osmotic shock to the vesicles and to obtain buffer-filled vesicles and c) diluting a mixture of the aqueous medium and the basic or acidic buffer containing the buffer- filled vesicles by adding a neutralizing solution to obtain transmembrane pH-gradient vesicles suspended in a suspension buffer, wherein the suspension buffer differs from the basic or acidic buffer in pH value.La invención se refiere a un método para preparar vesículas con gradiente de pH de transmembrana； este método se caracteriza por los siguientes pasos: a) preparar vesículas hechas de por lo menos una sustancia de matriz en un medio acuoso que tiene una osmolaridad de no más de 200 mOsmoles/l, en donde la sustancia de matriz se selecciona del grupo que consiste de lípidos anfifílicos y copolímeros de bloque anfifílicos, b) transferir las vesículas en un regulador de pH básico o ácido que tiene una osmolaridad que es por lo menos 200 mOsmoles/l mayor que la osmolaridad del medio acuoso del paso a) para aplicar un choque osmótico a las vesículas y para obtener vesículas llenas de regulador de pH, y c) diluir una mezcla del medio acuoso y el regulador de pH básico o ácido que contiene a las vesículas llenas de regulador de pH añadiendo una solución neutralizante para obtener vesículas con gradiente de pH de transmembrana suspendidas en un regulador de pH de suspensión, en donde el regulador de pH de suspensión difiere del regula
