The present invention relates to a method for the preparation of transmembrane ph gradient vesicles. This method is characterized by the following steps: (a) preparing vesicles made from at least one matrix substance in aqueous medium having an osmolarity not greater than 200 mosm / l, wherein the matrix substance is chosen from the group consisting of amphiphilic lipids and amphiphilic block copolymers, b) transfer the vesicles to a basic or acidic buffer with an osmolarity being at least 200 mosm / l greater than the aqueous medium osmolarity of step a) to apply an osmotic shock to the vesicles and obtain buffer-filled vesicles, and c) dilute a mixture of the aqueous medium and the basic or acidic buffer containing the buffer-filled vesicles by the addition of a neutralizing solution to obtain transmembrane ph gradient vesicles suspended in a suspension buffer, wherein the buffer suspension differs from the acidic or basic buffer in terms of ph value.a presente invenção refere-se a um método para a preparação de vesículas de gradiente de ph transmembranar. esse método é caracterizado pelas etapas a seguir: a) preparar vesículas feitas a partir de pelo menos uma substância de matriz em meio aquoso, tendo uma osmolaridade não maior que 200 mosm/l, em que a substância da matriz é escolhida do grupo consistindo em lipídios anfifílicos e copolímeros em bloco anfifílicos, b) transferir as vesículas para um tampão básico ou ácido com uma osmolaridade sendo pelo menos 200 mosm/l maior do que a osmolaridade do meio aquoso da etapa a) para aplicar um choque osmótico às vesículas e obter vesículas preenchidas com tampão, e c) diluir uma mistura do meio aquoso e do tampão básico ou ácido contendo as vesículas preenchidas com tampão pela adição de uma solução neutralizante para obter vesículas de gradiente de ph transmembranares suspensas em um tampão de suspensão, em que o tampão de suspensão difere do tampão ácido ou básico em termos de valor de ph.