本发明公开了一种信号肽优化靶向CD19的嵌合抗原受体、表达该嵌合抗原受体的T细胞及制备方法和应用,所述信号肽优化靶向CD19的嵌合抗原受体包含顺序串联的跨膜蛋白信号肽、抗CD19抗体单链可变区、CD8蛋白分子的铰链区、跨膜区、4‑1BB共刺激结构域与CD3ζ胞内信号传导结构域,其中,所述跨膜蛋白信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示,该嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID No.11或SEQ ID No.12或SEQ ID No.13所示,该靶向CD19的嵌合抗原受体在T细胞中更加高效、稳定表达,以更好地发挥对靶细胞的杀伤作用。