Embodiments include methods of making protein-PEG conjugates. The method may comprise providing an aqueous protein solution. The aqueous protein solution may comprise a protein, a pH buffering agent, and a chelating agent. Wherein said chelating agent is selected from the group consisting of aminopolycarboxylic acids, hydroxyaminocarboxylic acids, N-substituted glycine, 2- (2-amino-2-oxocyclo) aminoethanesulfonic acid (BES), and deferoxamine Lt； / RTI >； The method may also include the step of introducing sodium cyanoborohydride and methoxypolyethylene glycol aldehyde into the aqueous protein solution. The sodium cyanoborohydride in the methoxypolyethylene glycol aldehyde may have a molar ratio ranging from about 5: 1 to about 1.5: 1. The method may further comprise reacting the methoxypolyethylene glycol aldehyde with the protein to form the protein-PEG conjugate. The pH buffer may maintain the pH of the aqueous protein solution within the range of 4.0 to 4.4 during the reaction.실시예는 단백질-PEG 콘쥬게이트를 제조하는 방법을 포함한다. 상기 방법은 수성 단백질 용액을 제공하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 수성 단백질 용액은 단백질, pH 완충제, 및 킬레이트제를 포함할 수 있다. 상기 킬레이트제가 아미노폴리카르복실산, 히드록시아미노카르복실산, N-치환된 글리신, 2-(2-아미노-2-옥소크틸) 아미노에탄 술폰산 (BES), 및 데페록사민 (DEF)으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 방법은 또한 소듐 시아노보로히드리드 및 메톡시 폴리에틸렌 글리콜 알데히드를 상기 수성 단백질 용액에 도입하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 메톡시 폴리에틸렌 글리콜 알데히드 중 상기 소듐 시아노보로히드리드는 약 5:1 내지 약 1.5:1 범위의 몰비를 가질 수 있다. 상기 방법은 상기 메톡시 폴리에틸렌 글리콜 알데히드를 상기 단백질과 반응시켜서 상기 단백질-PEG 콘쥬게이트를 형성시키는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 pH 완충제는 상기 반응 동안 상기 수성 단백질 용액의 pH를 4.0 내지 4.4 범위로 유지시킬 수 있다.
