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Methods for screening bioactive natural products
专利权人:
バクテボ リミテッド
发明人:
ウィリアムズ, デイヴィッド ヒュー,ウェイン, ジョン リチャード,ウッズ, スチュアート ロバート,ウィリアムズ, デイヴィッド ヒュー,ウェイン, ジョン リチャード,ウッズ, スチュアート ロバート
申请号:
JP2017528928
公开号:
JP2018500891A
申请日:
2015.12.09
申请国别(地区):
JP
年份:
2018
代理人:
摘要:
A method for screening a mutant prokaryotic cell to identify a producer of a cytotoxic agent active against a target cell, comprising: (a) providing a prokaryotic progenitor cell; and (b) step. A step of generating a pool of mutagenic cells by transmutating the cells of (a) with an activated transposon (TnA), wherein TnA is at or near its insertion site in the DNA of said progenitor cells A volume containing an outward promoter (TnAP) capable of increasing transcription of the gene; and (c) a volume of individual members of the pool of step (b) suspended in an immiscible carrier liquid Co-encapsulate with one or more target cells in a microdroplet containing an aqueous growth medium of Generating a library of microdroplets each comprising (d) the microdroplet library of step (c) suitable for co-culture of a single mutagen cell and target cell (s) Incubating under various conditions to produce a library of microcultures, wherein the mutagenic cells that produce cytotoxic agent (s) active against the target cell (s) are each microculture And (e) a microculture library in step (d), wherein the target cell has been overtaken by a mutagen cell or overwhelmed and extinguished. A method comprising screening for. [Selection figure] None標的細胞に対して活性な細胞毒性剤の産生体を特定するために変異原核細胞をスクリーニングするための方法であって、(a)産生体原核種の細胞を用意するステップと、(b)ステップ(a)の細胞を活性化トランスポゾン(TnA)でトランスポゾン変異生成することにより変異産生体細胞のプールを生成するステップであり、ここでTnAは、前記産生体細胞のDNAにおけるその挿入部位又は近傍で遺伝子の転写を増加させることができる外向きプロモーター(TnAP)を含んでいる、ステップと、(c)ステップ(b)のプールの個々のメンバーを、非混和性キャリア液体に懸濁されたある体積の水性増殖培地を含む微小液滴で1つ又は複数の標的細胞と共封入し、それにより、単一変異産生体細胞と1つ又は複数の標的細胞とをそれぞれ含む微小液滴のライブラリを生成するステップと、(d)ステップ(c)の微小液滴ライブラリを、単一の変異産生体細胞と(1つ又は複数の)標的細胞との共培養に適切な条件下でインキュベートして、微小培養物のライブラリを作製するステップであって、(1つ又は複数の)標的細胞に対して活性な細胞毒性剤を産生する変異産生体細胞が各微小培養物において標的細胞の増殖を追い越すステップと、(e)ステップ(d)の微小培養物のライブラリを、標的細胞が変異産生体細胞により増殖が追い越されているか又は圧倒されて消滅している微小培養物についてスクリーニングするステップとを含む方法が開示される。【選択図】なし
来源网站:
中国工程科技知识中心
来源网址:
http://www.ckcest.cn/home/

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