本发明公开了一种花生Δ9‑硬脂酰‑ACP脱氢酶基因AhSAD启动子(PAhSAD)及制备方法和应用。该启动子如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列,利用基因组步移方法克隆PAhSAD序列,用SDS裂解法提取基因组DNA,在不同体系中分别用平末端核酸内切酶酶切DNA,和接头片断连接后,以GSP1和AP1为引物进行第一轮PCR扩增,以GSP2和AP2为引物进行第二轮扩增,获得含有PAhSAD的DNA序列。本发明的启动子PAhSAD具有驱动外源基因表达的功能,其表达部位在植物的根部、茎部、叶片、果针及种子中,这一具有组织特异性表达的启动子在植物基因工程中具有重要应用价值。