本发明提供了一种O型口蹄疫合成肽疫苗,具体涉及用于O型口蹄疫合成肽疫苗的多肽或其多肽聚合物,以及含有该多肽或其多肽聚合物的疫苗及它们的制备方法,所述多肽具有SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQID NO.3所示的氨基酸序列。本发明通过对国内口蹄疫流行毒株的序列测定,研究其主要抗原位点的变异情况,同时结合计算机辅助进行抗原位点分析预测,对可能的抗原位点肽段进行化学合成。通过大量动物试验对这些候选多肽抗原进行筛选,根据筛选结果对口蹄疫病毒抗原位点进行了优化,并有效组合了T细胞表位和B细胞表位,增强了多肽抗原的免疫效果。该O型口蹄疫合成肽疫苗可以有效应对口蹄疫病毒的抗原变异,生物安全性好,易于大规模合成,具有良好的应用前景。