本发明属于猪基因工程技术领域，具体涉及一种猪肌肉特异表达基因MLC2启动子的克隆鉴定与应用。其步骤包括：提取“大白猪”肌肉组织总DNA，设计引物，PCR扩增获得猪MLC2基因5’端侧翼核苷酸序列(1704bp)，构建15个长度不同的MLC2启动子缺失片段的荧光素酶报告基因质粒，转染C2C12细胞，检测每个缺失片段的启动子的活性，鉴定获得猪MLC2基因的启动子。其中，猪MLC2基因启动子的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示(1704bp)，在所述的MLC2基因的启动子中还包含具有活性的15个启动子的片段，它们的核苷酸序列分别如序列表SEQ ID NO：2-16所示。本发明为猪的遗传改良和转基因提供了重要的元件和手段，可强化猪转基因表达的肌肉组织特异性和稳定性。
