本发明公开了美人鱼发光杆菌快速检测引物、试剂盒及应用,其引物由外引物和内引物组成,外引物由SEQ ID NO.1所示的外引物上游引物和SEQ ID NO.2所示的外引物下游引物组成;内引物由SEQ ID NO.3所示的内引物上游引物和SEQ ID NO.4所示的内引物下游引物组成。本发明解决了现有技术检测美人鱼发光杆菌周期长、检测成本高、不能应用于现场检测等问题,检测快速有序,实现了检测过程的程序化和标准化,操作规范,不易出错。扩增引物具有很好的特异性和准确性。采用内置染料的方法,反应结束后不用打开反应管,取出后直接肉眼观察结果,避免了被扩增产物污染后续待检样品,提高了该试剂盒的应用可靠性。