本发明提供一种具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法,包括制备木枣多糖和对木枣多糖进行分离纯化,对木枣多糖进行分离纯化步骤是:先将木枣多糖通过DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱,依次用PBS溶液和NaCl‑PBS溶液梯度洗脱进行分离,再通过Sephacryl S‑300凝胶柱进行纯化。通过本发明制备方法能够一次性分离纯化得到三种木枣抗氧化活性多糖PZMP1、PZMP2和PZMP3,通过本发明分离纯化得到的三种木枣抗氧化活性多糖不仅纯度较高,纯度能够高达90%以上,而且得率较高,以木枣粗多糖为基数,PZMP1得率为2.95%,PZMP2得率为14.15%,PZMP3得率为14.61%。除此之外,本发明分离纯化得到的三种木枣抗氧化活性多糖均有较强的抗氧化性,为抗氧化性功能食品提供原料,促进了木枣的可持续性发展。