There is disclosed a novel means capable of stable mass production of a knockout entity even in large animals. The method of the present invention is a method for producing a non-human large mammal or fish (non-human animal) that produces a spouse derived from this individual, comprising the steps of: culturing a mammal having a genome in which the function of the nanos3 gene derived from the first non-In which at least one pluripotent cell derived from a second non-human animal is transplanted to prepare a chimeric embryo, and then generating the chimeric embryo to obtain an individual. In the case of using pluripotent cells having a genome in which a desired gene is knocked out as a cell derived from a second non-human animal, germ cells in which a desired gene is knocked out can be produced in the first non-human animal. It is easy to mass-produce a knockout non-human animal.대동물에 있어서도 녹아웃 개체의 안정적인 양산을 가능하게 하는 신규인 수단이 개시되어 있다. 본 발명의 방법은, 이개체 유래의 배우자를 생산하는 비인간 대형 포유 동물 또는 어류(비인간 동물)의 작출 방법으로서, 제 1 비인간 동물에 유래하는 nanos3 유전자의 기능이 저해된 게놈을 갖는 난할기의 배에 제 2 비인간 동물에 유래하는 적어도 1개의 다능성 세포를 이식해서 키메라배를 조제하고, 상기 키메라배를 발생시켜서 개체를 얻는 것을 포함한다. 제 2 비인간 동물 유래의 세포로서 소망의 유전자가 녹아웃된 게놈을 갖는 다능성 세포를 이용한 경우에는 제 1 비인간 동물에 소망의 유전자가 녹아웃된 생식세포를 만들게 할 수 있으므로, 그러한 비인간 동물의 교배에 의해 용이하게 녹아웃 비인간 동물을 양산할 수 있다.
