A method for producing Leydig-like cells from human pluripotent stem cells is provided. Furthermore, Leydig-like cells derived from human pluripotent stem cells are provided. Leydig-like cells can be produced by overexpressing the NR5A1 gene in human pluripotent stem cells. The human pluripotent stem cell-derived Leydig-like cell of the present invention can be produced by a method comprising 1) introducing NR5A1 gene into human pluripotent stem cells, and 2) expressing NR5A1 in human pluripotent stem cells. it can. The human pluripotent stem cell-derived Leydig-like cell produced by the method of the present invention has testosterone-producing ability, and expresses any one of INSL3, 17βHSD3 and LHCGR.ヒト多能性幹細胞からライディッヒ様細胞への作製方法を提供する。さらには、ヒト多能性幹細胞由来のライディッヒ様細胞を提供する。ヒト多能性幹細胞にNR5A1遺伝子を過剰発現させることで、ライディッヒ様細胞を作製することができる。本発明のヒト多能性幹細胞由来ライディッヒ様細胞は、1)ヒト多能性幹細胞にNR5A1遺伝子を導入する工程、及び2)ヒト多能性幹細胞にNR5A1を発現させる工程含む方法で作製することができる。本発明の方法で作製されたヒト多能性幹細胞由来ライディッヒ様細胞はテストステロン産生能を有し、INSL3、17βHSD3及びLHCGRからなるいずれかが発現する。