本发明公开了转基因苜蓿草J101品系特异性环介导等温扩增检测用引物及检测方法和应用。所述引物的序列分别如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.6所示。本发明针对我国农业部未颁发农业转基因生物安全证书的美国孟山都公司转基因苜蓿草品系J101,首次提供了一组特异性引物,以BstDNA聚合酶启动环介导等温扩增。通过对LAMP检测体系的优化,成功建立了苜蓿草J101品系特异性LAMP快速检测体系,操作简单,特异性强,灵敏度高,检测结果准确,检测最低拷贝数为10,能够快速、准确、地对转基因苜蓿草J101成分进行检测分析和鉴定。