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PHD2蛋白的体外表达与纯化方法
- 专利权人:
- 中国科学院大连化学物理研究所
- 发明人:
- 朴海龙,夏天
- 申请号：
- CN201611133381.6
- 公开号：
- CN108220257A
- 申请日:
- 2016.12.10
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2018
- 代理人:
- 马驰
- 摘要：
- 本发明公开了一种PHD2蛋白的体外表达与纯化的方法，其特征在于：使用In‑Fusion无缝克隆技术将编码PHD2蛋白的EGLN1基因序列克隆到原核表达表达载体pETnT中，并与pETnT载体具有的His，Flag和HA小分子量蛋白标签序列融合，将EGLN1‑pETnT载体转化到大肠杆菌株系BL21(DE3)中，大量培养，加入IPTG诱导重组PHD2蛋白表达。蛋白表达后，利用重组PHD2融合的His标签，使用Ni‑TNA材料对蛋白进行纯化。纯化后进行SDS‑PAGE电泳，使用考马斯亮蓝染色的方法对蛋白表达情况进行检测，同时利用融合的Flag标签的特异抗体，检测蛋白的纯度。经检测使用本方法获得了纯度较高的PHD2蛋白。本方法的建立为获得大量高纯度的PHD2蛋白创造了条件，为深入研究PHD2蛋白的生物学功能打下了基础。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
