The present invention relates generally to methods for preparing polyethylene glycol (“PEG”) conjugated hemoglobin (“Hb”) using reduced reactant ratios. More specifically, the present invention relates to methods for preparing PEG conjugated Hb (“PEG-Hb”) with enhanced yield and purity.本発明は、一般に、低い反応成分比を用いて、ポリエチレングリコール(「PEG」)結合体化ヘモグロビン(「Hb」)を調製するための方法に関する。より具体的には、本発明は、高められた収量および純度でPEG結合体化Hb(「PEG-Hb」)を調製するための方法に関する。上記方法は、a)水性希釈剤中でヘモグロビン(Hb)を2-イミノチオラン(2-IT)と混合してチオール化Hbを形成する工程;および該水性希釈剤中でポリエチレングリコール(PEG)-マレイミド(Mal)を該チオール化Hbに加えてPEG-Hb結合体を形成する工程を含む。