A recombinant construct comprising a first promoter, preferably a tRNA promoter operably linked to a first polynucleotide encoding a first single guide RNA, and a second promoter operably linked to a second polynucleotide, encoding a Cas9 polypeptide, Vectors and expression cassettes are provided herein. The first single guide RNA comprises a first portion complementary to a strand of a target sequence of a DNA virus and a second portion capable of interacting with a Cas9 polypeptide. A Cas9 polynucleotide derived from a codon-optimized Staphylococcusaureus , and a polypeptide having a nuclear localization signal and optionally an epitope tag. RTI ID = 0.0 >； tRNA <； / RTI >； Also provided is a method of inhibiting viral replication using the composition, inhibiting the expression of a target sequence from the virus, or treating a viral infection or viral induced cancer.적합하게는 제1 단일 가이드 RNA를 코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 tRNA 프로모터인 제1 프로모터 및 Cas9 폴리펩티드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 제2 프로모터를 포함하는 재조합 구축물, 벡터 및 발현 카세트를 본원에서 제공한다. 제1 단일 가이드 RNA는 DNA 바이러스의 표적 서열의 가닥에 상보성인 제1 부분 및 Cas9 폴리펩티드와 상호작용할 수 있는 제2 부분을 포함한다. 코돈 최적화된 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 유래 Cas9 폴리뉴클레오티드, 및 핵 국재화 (nuclear localization) 신호 및 임의로 에피토프 태그를 갖는 폴리펩티드를 또한 제공한다. tRNA를 포함하는 sgRNA의 생산을 위한 구축물을 또한 제공한다. 조성물을 사용하여 바이러스 복제를 억제하거나, 바이러스로부터 표적 서열의 발현을 억제하거나, 바이러스 감염 또는 바이러스 유도된 암을 치료하는 방법을 또한 제공한다.
