本发明公开了一种狂犬病‑犬瘟热‑犬细小病毒基因重组病毒株、构建方法及其应用。本发明通过同源重组、基因替换和基因插入方法对病毒全长基因组进行基因重排,构建带有犬瘟热G基因和犬细小病毒VP2基因的重排狂犬病病毒基因组质粒,命名:狂犬病‑犬瘟热‑犬细小病毒,即pcDSRV9‑NG‑eGFP+CDV N‑PM+VP2‑L基因组质粒;通过反向遗传法拯救出狂犬病‑犬瘟热‑犬细小病毒,即rSRV9+CDV N+VP2基因重组病毒,重组狂犬病病毒的基因核苷酸序列为SEQ ID NO:1。本发明的重组基因病毒可用于犬科动物及其他野生动物狂犬病、犬瘟热、细小病毒三联口服疫苗研制以预防三种传染性疾病。