本发明提供一种VP2融合基因、重组狂犬病病毒rHEP‑rVP2株、构建方法及其应用,属于微生物免疫学领域。VP2融合基因序列如SEQ ID NO:1所示。重组狂犬病病毒rHEP‑rVP2株,是在HEP‑Flury株基因组的G基因和L基因之间插入VP2融合基因后得到的。重组狂犬病病毒rHEP‑rVP2株构建方法,包括在HEP‑Flury株全长cDNA中插入VP2融合基因构建重组质粒,转染宿主细胞,拯救病毒,得到rHEP‑rVP2株。重组狂犬病病毒rHEP‑rVP2株,与亲本株具有相似的病毒滴度,具有较好的免疫原性,免疫后能够产生较高水平针对狂犬病病毒和犬细小病毒抗体,可作为二价疫苗候选毒株。