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一种利用CRISPR/Cas9在哺乳动物细胞中实现大片段DNA定点整合的方法
- 专利权人:
- 中山大学
- 发明人:
- 黄翔,何祖勇,刘小凤,刘小红,陈瑶生
- 申请号：
- CN201710220878.X
- 公开号：
- CN107142282A
- 申请日:
- 2017.04.06
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2017
- 代理人:
- 单香杰
- 摘要：
- 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9在哺乳动物细胞中实现大片段DNA定点整合的方法，包括如下步骤：(1)靶向CCR5基因的CRISPR/Cas9打靶系统的构建：打靶系统由Cas9/sgRNA表达载体和打靶供体组成，所述打靶供体包括启动子、荧光标记基因、中间含有gRNA靶序列的与目的基因的同源序列的设计；(2)CRISPR/Cas9打靶系统共转染哺乳动物细胞，转染后分选稳定表达荧光的细胞，进行单细胞克隆培养；(3)单细胞克隆PCR鉴定检测定点整合效率，获得高效定点定向整合的哺乳动物细胞。本发明能实现1个6kb以上大片段DNA在哺乳动物细胞中的定点定向整合。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
