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一种利用ZFN在哺乳动物细胞中实现多个大片段DNA定点整合的方法
- 专利权人:
- 中山大学
- 发明人:
- 何祖勇,黄翔,刘小凤,刘小红,陈瑶生
- 申请号：
- CN201710221751.X
- 公开号：
- CN107217074A
- 申请日:
- 2017.04.06
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2017
- 代理人:
- 单香杰
- 摘要：
- 本发明公开了一种利用ZFN在哺乳动物细胞中实现多个大片段DNA定点整合的方法，包括如下步骤：(1)构建靶向CCR5基因的单交换ZFN打靶系统：单交换ZFN打靶系统包括针对切割靶点的左、右ZFN表达载体和多个使用不同荧光标记的打靶供体；每个打靶供体的设计包括启动子、荧光标记基因、目的基因左右同源臂以及左右同源臂衔接处的ZFN打靶位点的设计；(2)ZFN打靶系统共转染哺乳动物细胞，转染后利用流式分选稳定表达荧光的细胞；(3)步骤(2)分选的细胞进行PCR检测和测序鉴定，实现在哺乳动物细胞中进行多个DNA大片段的依次定点定向插入。本发明能实现多个6kb以上大片段DNA在哺乳动物细胞中的定点定向整合。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
