本发明涉及了一种特异性针对人NOTCH1 NICD蛋白Tyr2145位点磷酸化抗原肽、抗体、上述抗原肽和抗体的应用以及上述抗体的制备方法。所述抗体是通过活性氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,且其中的Tyr氨基酸被磷酸化作为抗原肽免疫动物制备得到的。本发明在制备所述抗体时,利用亲和纯化‑亲和分离技术对抗血清进行纯化。所述制备方法具有制备周期短、抗体的效价高、回收率好等优势,获得的抗体具有高特异性、高亲和力,本发明提供的磷酸化抗体有助于揭示NOTCH1 NICD蛋白的磷酸化修饰在肿瘤等疾病发生发展过程中的作用机制,在肿瘤诊断、治疗及预后判定等方面具有广泛的临床应用前景。