本发明公开了一种重组的非洲猪瘟病毒结构蛋白pKP177R亚单位可溶性蛋白及其制备方法和应用,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述制备方法如下:1)将密码子优化后的非洲猪瘟病毒pKP177R蛋白如SEQ ID NO.2所示的编码基因序列克隆到原核表达载体中,得到重组质粒;2)再将所述重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞中,得到重组表达的菌株;3)通过培养、筛选步骤2)中所述重组表达的菌株,得到高度表达的菌株;4)发酵培养步骤3)中所述高度表达的菌株,纯化后,得到重组的非洲猪瘟病毒pKP177R亚单位可溶性蛋白。本发明能够提供一种可大规模工业化生产的非洲猪瘟结构蛋白pKP177R亚单位可溶性蛋白且制备方法简单、成本低,能够达到国家现有标准。