Obshchestvo s ogranichennoj otvetstvennostyu "Mezhdunarodnyj Biotekhnologicheskij Tsentr "Generium"
发明人:
Ershov Aleksandr Viktorovich (RU),Ершов Александр Викторович (RU),Ershova Olga Anatolevna (RU),Ершова Ольга Анатольевна (RU),Leonov Vyacheslav Sergeevich (RU),Леонов Вячеслав Сергеевич (RU)
申请号：
RU2019109117
公开号：
RU0002698460C1
申请日:
2019.03.28
申请国别(地区):
RU
年份:
2019
代理人:
摘要：
FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to biotechnology and solves the problem of obtaining highly purified enzymatically active recombinant β-1,4-galactosidase BgaA, suitable for use at the remodeling step for producing therapeutically functional preparations of glycoproteins with given properties, to develop tools for high-sensitivity analysis of glycan chains of plant, animal and microbial glycoproteins. Method comprises using metal chelate, pseudo-affine, hydrophobic, anion-exchange, concentrating chromatography followed by polishing gel filtration, wherein protein from soluble fraction of cell lysate is purified by two chromatography steps on same Ni2+ metal chelate sorbent under different elution conditions and pseudo-affine chromatography in breakthrough mode on Blue Sepharose.EFFECT: use of said three steps helps to maximize purity of the preparation from major contaminating impurities.10 cl, 8 dwg, 3 tbl, 6 exИзобретение относится к области биотехнологии и решает задачу получения в промышленных объемах высокоочищенной ферментативно активной рекомбинантной β-1,4-галактозидазы BgaA, пригодной для использования на стадии ремоделирования для получения терапевтически функциональных препаратов гликопротеинов с заданными свойствами, для разработки инструментов для высокочувствительного анализа гликановых цепей гликопротеинов тканей растений, животных и микроорганизмов. Способ предусматривает применение металлохелатной, псевдоаффинной, гидрофобной, анионобменной, концентрирующей хроматографии с последующей полирующей гель-фильтрацией, при этом белок из растворимой фракции клеточного лизата очищают с помощью двух стадий хроматографии на одном и том же Ni2+ металлохелатном сорбенте в различных условиях элюции и псевдоаффинной хроматографией в режиме проскока на Blue Sepharose. Применение вышеуказанных трех стадий помогает максимально очистить препарат от мажорных контаминирующих примесей. 9 з.п. ф-лы, 8 ил., 3 табл., 6 пр.
