That the medium containing adrenocorticotropic hormone, FGF receptor inhibitor, a GSK3 inhibitor and MEK activation inhibitor, and culturing the inner cell mass of a mammal, and the invention, the mammalian ES cells from culture providing includes the step of isolating, a method of manufacturing a mammalian ES cells.本発明は、副腎皮質刺激ホルモン、FGF受容体阻害剤、MEK活性化阻害剤及びGSK3阻害剤を含む培地中で、哺乳動物の内細胞塊を培養すること、及び培養物から哺乳動物ES細胞を単離することを含む、哺乳動物ES細胞の製造方法を提供する。