Disclosed is a method for producing a recombinant human α-galactosidase A (rh α-Gal A) at a high purity on a large scale. The method comprises the steps of (a) culturing rh α-Gal A-producing mammalian cells in serum-free medium, (b) collecting the culture supernatant, (c) applying a culture supernatant to anion-exchange column chromatography Column chromatography using hydrophobic column chromatography, (e) affinity for phosphate groups as a solid phase, (f) cation-exchange column chromatography, (g) A chemical column chromatography step, and (h) a gel filtration column chromatography step.개시되는 것은 고순도로, 대규모로 재조합 인간 α-갈락토시다아제 A (rh α-Gal A) 를 제조하는 방법이다. 상기 방법은 (a) 무혈청 배지에서 rh α-Gal A-생성 포유동물 세포를 배양하는 단계, (b) 배양 상청액을 수집하는 단계, (c) 음이온-교환 컬럼 크로마토그래피에 배양 상청액을 적용하는 단계, (d) 소수성 컬럼 크로마토그래피 단계, (e) 포스페이트 기에 대한 친화성을 갖는 물질을 고체 상으로서 사용하는 컬럼 크로마토그래피 단계, (f) 양이온-교환 컬럼 크로마토그래피 단계, (g) 염료-친화성 컬럼 크로마토그래피 단계, 및 (h) 겔 여과 컬럼 크로마토그래피 단계를 순서대로 포함한다.