一种重组工程介导的苜蓿中华根瘤菌Rm1021基因敲除方法
- 专利权人:
- 南京师范大学
- 发明人:
- 尚广东,陈中秋,庄浩,李玲
- 申请号：
- CN201410295367.0
- 公开号：
- CN104046647A
- 申请日:
- 2014.06.26
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2014
- 代理人:
- 卢亚丽
- 摘要：
- 本发明涉及一种重组工程介导的苜蓿中华根瘤菌Rm1021基因敲除方法。具体实施步骤为首先通过重叠－延伸聚合酶链式反应扩增获得两侧为针对待敲除基因的约500bp同源片段、中间为卡那霉素抗性基因的融合DNA片段。其次将此DNA片段电转化至异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组酶表达的Rm1021细胞中，在卡那霉素抗性筛选之下，卡那霉素抗性基因取代目的基因而获得基因敲除变株。最后将菌株在含0.4％蔗糖的固体培养基中培养以消除含重组酶基因的质粒。所使用的重组酶基因来源于λ噬菌体并克隆在质粒pLS2406之上，pLS2406同时含有负筛选标记sacB基因。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
